液相色譜儀色譜柱的選擇
在選擇液相色譜儀色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質，他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等。樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在1**%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受1**%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。
液相色譜儀色譜柱選擇的思路
1、確定分離目的，確定液相色譜儀是否要求高分離度、短分析時間、高靈敏度、長柱壽命，低的實驗成本等。
2、評估分析物的化學性質，諸如化學結構、溶解性、穩定性等。
3、選擇合適的色譜柱，了解色譜填料的物理和化學性質。
液相色譜儀色譜柱選擇的條件
1、填料基質
①硅膠基質：純度高本錢低，強度大，化學修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質填料在pH2-8之間穩定，但經過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩定在pH1.5-10。
②聚合物基質：應用pH值范圍寬，溫度穩定(高溫可以達到80度以上)，機械強度小。
2、顆粒外形
大多現代液相色譜儀填料都是球形顆粒，但有時是不規則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格。
3、顆粒粒徑
粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時會導致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復雜樣品，液相色譜儀可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
4、含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關。高含碳量進步柱容量、分辨率及分析時間，用于要求高分離度的復雜樣品;低含碳量分析時間短、展現不同的選擇性，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
5、孔徑和比表面積
液相色譜儀吸附介質是多孔的顆粒，盡大多數的反應表面于孔內。因此，分子必須進進孔內才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念。孔徑小比表面積大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保存，上樣量和復雜成分的分離度;比表面積小，平衡時間快，適合梯度分析。
6、孔容和機械強度
孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應填料的機械強度。孔體積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱。孔體積為1.5mL/g或更小的填料大多用于液相色譜儀分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
7、封端
封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產生的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產生不同的選擇性，尤其是極性樣品。
液相色譜儀色譜柱填料的選擇
液相色譜儀中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。
一、硅膠基質填料
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠以及其它具有極性官能團，如胺基團和氰基團的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份Zxian被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正己烷、氯仿、二氯甲烷等。
2、反相色譜
反相色譜用的填料常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份Zxian被沖洗出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。常用的反相填料有：C18、C8、C4、C6H5等。
二、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優點是在pH值為1～14均可使用。相對于硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。現有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。
三、其它無機填料
其它無機填料液相色譜儀色譜柱也已經商品化。由于其特殊的性質，一般于特殊的用途。
石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體，又由于在液相色譜儀流動相中不會被溶解,這類柱可在任何pH與溫度下使用。
氧化鋁也可用于液相色譜儀，氧化鋁微粒剛性強，可制成穩定的色譜柱柱床，其優點是可在pH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應用。
新型氧化鋯基質色譜填料也可用于液相色譜儀，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用pH范圍1～14，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是Z近幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優勢尚在進行中。
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