培養方法

EBTr（NBL-4） 牛胚氣管細胞

貼壁，上皮細胞樣

編號： 337670

培養：37℃，5%CO₂ CM2-1 培養液

產品形式： 2mL 凍存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶 ；

安全等級： 一級，安全柜或超凈臺操作

收貨須知：收貨當天發現異常，請在 24 小時內及時聯系客服，逾期視為收貨良好；凍存管形式，收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若 長時間不使用，應過夜轉移至液氮保藏；T25 形式，收貨后先培養瓶原裝置于培養箱靜養 4h，然后再對細胞進行常規操作。復蘇時每 管一次用完不得留存，復蘇后傳一代，即可正常使用。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發服務。

培養條件：37℃，5%CO₂，CM2-1 培養液。CM2-1 培養液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640 培養基，含谷氨酰胺。

復蘇步驟：

①新制 100mm 平皿 1 個，含 12mL 上述培養液；

②凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入 安全柜復蘇；

③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時針搖勻；

④放入（37℃，5%CO₂）培養箱中，過夜換液，2-4 天長滿。

傳代/凍存：將舊培養液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 6mL（/100mm 皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養皿，細胞剛有脫落 時，則吸除大部分胰酶，留約 0.5mL，移至培養箱消化，約 5min 取出。

①傳代：用 12mL CM2-1 培養液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后 可分 3~6 皿培養；

②凍存：用 6mL 凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為 6 支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。

復蘇質量記錄：根據復蘇要求，對以上細胞株進行復蘇，記錄結果如下：

項目	質量標準	復蘇記錄
復活性：	12h 貼壁，90h 長滿 80%	過夜 18h 后觀察貼壁，90h 密度達 90%
細胞形態：	貼壁，上皮細胞樣	CM2-1 培養液中，貼壁，上皮細胞樣，梭形、圓形
附圖：
結論：	復活性好，且細胞形態無異常，合格

質檢員/日期： 楊晴 2018.9.30 審核員簽字：曹勛

關于此細胞株更多信息可在 BNCC 官網查詢：www.bncc.org.cn