MolPure^® Micro DNA Kit采用MolPure^® DNA Column M3和新型的溶液體系，適用于從微量血液、法醫材料、干血點、藥簽、口香糖、尿液等微量樣品中快速地提取基因組DNA。提取過程不需要用到有毒的酚氯仿等有機物抽提，也不需要用到耗時的乙醇沉淀。操作簡便，可在30 min內完成單個樣品的DNA提取和純化工作。試劑盒內的MolPure^® DNA Column M3可選擇性吸附核酸，不吸附蛋白質、多糖和其它非核酸類物質，得到的DNA純度高，可直接用于PCR、qPCR等實驗。

 

試劑盒組分

類別	編號	組分名稱	18780ES50 (50 T)	18780ES70 (200 T)
Part I	18780-A	Proteinase K (20 mg/mL)	1 mL	1 mL× 4
	18780-B	Carrier RNA	200 μL	800 μL
Part II	18780-C	DNA吸附柱M3 (MolPure® DNA Column M3)	50個	200個
	18780-D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube M3)	50個	200個
	18780-E	裂解液LB (LB Buffer M3)	11 mL	44 mL
	18780-F	結合液BD (BD Buffer M3)	15 mL	60 mL
	18780-G	去蛋白液PL (PL Buffer M3)	25 mL	100 mL
	18780-H	漂洗液W* (Wash Buffer*)	13 mL	50 mL
	18780-I	洗脫液 (Elution Buffer)	10 mL	20 mL

 

運輸與保存方法

Part I組分冰袋運輸，-20℃保存。Part II組分常溫運輸，常溫保存。產品有效期12個月。

 

注意事項

1. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

2. 結合液BD和去蛋白液PL低溫時可能析出，可37℃溫浴復溶至溶液澄清，不影響使用效果。

3. 結合液BD和去蛋白液PL中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

5. 本產品僅作科研用途！

 

實驗前準備

1. 自備設備和試劑：臺式離心機、振蕩儀、水浴鍋或金屬浴，100%無水乙醇，液氮（組織研磨用），1.5 mL離心管等。

2. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用可以達到12,000 rpm轉速的傳統臺式離心機。

3. 首次使用前，在漂洗液W^*瓶中加入4倍體積的無水乙醇，充分混勻后使用，并做好標記。如果發現由于運輸或保管不當造成容量嚴重不準，請用量筒定容后再加入指定體積的無水乙醇。每次使用后蓋緊瓶蓋，保持瓶中的乙醇含量。

4. Carrier RNA使用方法：如果起始處理量很少，我們推薦使用Carrier RNA，如果預期有較大量核酸產量，用戶可以根據需要選擇是否加入Carrier RNA。使用時在每個樣品提取所需結合液BD中加入4 μL Carrier RNA儲存溶液， 將結合液BD與Carrier RNA溶液充分顛倒混勻即可（結合液BD容易起泡沫，請勿使用渦旋振蕩混勻）。也可根據樣品數量，在總共需要的結合液BD中加入總共需要的Carrier RNA混勻備用。混合液在室溫24小時內穩定。

 

操作方法

 

一、樣本預處理：

1. 血液樣本

1）取10-100 μL血液至1.5 mL離心管中。加入10 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。

【注】：不足100 μL時，需用裂解液LB補足。

2）加入100 µL結合液BD，充分混勻，70℃放置10 min。

【注】：若預期DNA含量較低，建議在100 μL結合液BD中加入1 μL Carrier RNA儲存溶液。

3）冷卻后，加50 µL無水乙醇（自備，預冷），立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心收集管蓋內壁液滴。

4）室溫（15-25℃）放置3 min。

 

2. 血卡類樣本

1）打孔機取2-3個3 mm直徑的血卡紙片至1.5 mL離心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。

2）放置于56℃軌道搖床上面900 rpm振搖1 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴鍋或金屬浴中1 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。

3）加入200 µL結合液BD，充分混勻。

4）放置于70℃軌道搖床上面900 rpm振搖10 min。

【注】：亦可放置于70℃水浴鍋或金屬浴中10 min，期間每隔3 min渦旋振蕩10 sec。

 

3. 微量組織

1）取微量組織（< 10 mg）至1.5 mL 離心管中。加入180 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。

2）放置于56℃水浴鍋或金屬浴中 1 h至溶液變清亮，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。

3）加入200 µL結合液BD，充分混勻。

【注】：若預期DNA含量較低，建議在200 μL結合液BD中加入2 μL Carrier RNA儲存溶液。

4）冷卻后，加200 µL無水乙醇（自備，預冷），立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心收集管蓋內壁液滴。

5）室溫（15-25℃）放置5 min。

 

4. 口香糖

1）取30 mg 口香糖至1.5 mL離心管中。加入280 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。

2）放置于56℃軌道搖床上面900 rpm振搖3 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴鍋或金屬浴中3 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。

3）加入200 µL結合液BD，充分混勻。

【注】：若預期DNA含量較低，建議在200 μL結合液BD中加入2 μL Carrier RNA儲存溶液。

4）放置于70℃軌道搖床上面900 rpm振搖1 h。

【注】：亦可放置于70℃水浴鍋或金屬浴中1 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。

5）冷卻后，加200 µL無水乙醇（自備，預冷），立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心收集管蓋內壁液滴。

6）1,2000 rpm離心5 min，收集上清液。

 

5. 法醫檢材

1）煙頭：取1 cm² 煙頭，切成6塊轉移至1.5 mL離心管中。加入300 µL 裂解液LB和20 µL Proteinase K (20 mg/mL)，立刻渦旋振蕩充分混勻。

毛發：剪取靠近毛囊部位0.5-1 cm的毛發，轉移至1.5 mL離心管中。加入280 µL 裂解液LB、20 µL Proteinase K (20 mg/mL)和20 µL 1 M DTT溶液（自備），立刻渦旋振蕩充分混勻。

2）放置于56℃軌道搖床上面900 rpm振搖1 h。

【注】：亦可放置于56℃水浴鍋或金屬浴中1 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。

3）加入200 µL結合液BD，充分混勻。

【注】：若預期DNA含量較低，建議在200 μL結合液BD中加入2 μL Carrier RNA儲存溶液。

4）放置于70℃軌道搖床上面900 rpm振搖1 h。

【注】：亦可放置于70℃水浴鍋或金屬浴中1 h，期間每隔10 min渦旋振蕩10 sec。

5）1,2000 rpm離心5 min，收集上清液。

 

二、DNA提取：

1. 將DNA吸附柱M3套入2 mL收集管中，備用。

2. 將上述樣本預處理液加入DNA吸附柱M3中，12,000 rpm離心1 min，棄掉廢液。

【注】：混合液每次最大加入體積650 μL，可分多次離心。

3. 加入500 µL去蛋白液PL，12,000 rpm離心30 sec，棄廢液。

4. 加入600 µL漂洗液W^*，12,000 rpm室溫離心30 sec，棄廢液。

【注】：確保漂洗液W^*已添加無水乙醇。

5. 重復一遍步驟4。

6. 將DNA吸附柱M3放回收集管，空柱12,000 rpm室溫離心2 min，以除去殘留的漂洗液W^*。

7. 將DNA吸附柱M3放入新的1.5 mL離心管中，在DNA吸附柱M3中央加入20-50 μL洗脫液，室溫放置2 min。然后12,000 rpm離心1 min。收集濾液，即為DNA溶液。

【注】：可通過以下方式提高回收產量：①70℃預熱洗脫液；②將DNA濾液再次上柱，室溫放置2 min后，洗脫。

8. DNA溶液可置于-20℃長期保存。

 

HB220812