產品描述

D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術領域，特別是體內活體成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發光。當熒光素過量時，產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質粒轉染入細胞后，導入研究動物如大小鼠體內，之后注入熒光素，通過生物發光成像技術（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據生物發光強度的變化來指示能量或生命體征。

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前市場上有三種產品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內實驗。配成液體后的這三種產品，在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別。

產品性質

運輸和保存方法

室溫運輸。-20℃干燥避光保存，有效期2年。

使用方法

1．體外生物發光檢測
1） 用蒸餾水溶解D-熒光素鈉鹽，配制成30mg/ml的儲存液（200×）。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。
2） 用預熱好的組織培養基1:200稀釋儲存液，配制工作液（終濃度150µg/ml）。
3） 去除培養細胞的培養基。
4） 待圖像分析前，向細胞內添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析。

2．  活體成像分析
1） 用無菌的PBS（w/o Mg²⁺）或者DPBS（w/o Mg²⁺）配制D-熒光素鈉鹽工作液（15mg/ml），0.2µm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

2） 注射量取決于注射方式，具體如下：

3） 注射入體內10-20 min（待光信號達到最強穩定平臺期），再進行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。

注意事項

1) 本品（firefly luciferin）和甲蟲熒光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，僅僅是不同公司在命名上的差異。
2) 本品保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復凍融。
3) 注射方式，動物類型以及體重等都會影響信號的發射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定最佳信號平臺期和最佳的檢測時間。
4) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

HB220915