產品描述

BCECF是一種比率型pH熒光指示探針，Ex=503 nm，Em=530 nm。聯合現代化的熒光成像技術，使其在涉及pH變化的多種實驗中得到廣泛應用，如細胞生長調節，鈣調節，受體介導的信號轉導，鐵離子運輸內吞等。

BCECF,AM是BCECF基礎上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團，增加了疏水性，使其能夠輕易穿透活細胞膜。BCECF,AM本身沒有熒光，穿透細胞膜進入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成BCECF，后者被滯留在細胞內，隨pH變化發出綠色熒光。

產品性質

運輸與保存方法

室溫運輸。-20℃干燥避光保存，有效期2年。

注意事項

1）對于微量試劑，開封前，請稍微離心一下，以保證粉末落入管底。

2）由于BCECF,AM對濕度非常敏感，本粉末保存的過程中一定要保持干燥。對于配制好的BCECF,AM儲存液需要分裝凍存，且必須緊緊密封蓋子，干燥保存。

3）BCECF,AM工作液必須現配現用。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

5）本產品僅作科研用途！

使用方法（該方案僅做參考，具體染色時需根據細胞類型，細胞狀態及其他條件進行優化。）

1. 儲存液的配制

加入高質量無水DMSO將其配制成1-20 mM的儲存液。建議使用前進行配制，暫時不用的儲存液務必按照每次使用量分裝后于≤-20℃避光凍存。避免反復凍融！！！

2. 染色步驟

1）細胞準備

按照96孔板每孔100 uL 4～8×104個細胞，384孔板每孔25 uL1～2×104個細胞對細胞進行鋪板使其過夜生長。

注：對于不同的細胞需參照文獻對細胞密度進行優化調整。

2）BCECF,AM工作液的配制

根據具體使用量，取適量上述配制的儲存液，用HHBS（Hanks and 20 mM Hepes buffer）緩沖液稀釋成2-50 µM工作液。

3）染色。

分別加入等體積的BCECF,AM染液（96孔板，每孔加入100 µL; 384孔板每孔加入25 µL），于37℃細胞培養箱內孵育30-60 min。

注：a. 染色液中不能含有血清，因為血清中可能含有內源性酯酶活性，因此應避免；

  b. 染色液中不能含有氨基酸，因為存在的脂胺可能會斷裂AM基團，阻止染料的加載。

4）清洗

吸除染液，用HHBS清洗細胞2次。

5）加入適當量復合物后觀察熒光強度變化。

使用合適熒光顯微鏡或帶有圖像分析系統的激光共聚焦顯微鏡檢測細胞的熒光強度。可用490 nm、430 nm激發波長，530 nm發射波長對其進行比率測定。

HB180709