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Human IL-12 p70 ELISA Kit 人白細胞介素12 ELISA檢測試劑盒

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詳細介紹

 

白細胞介素 12(IL-12),也稱為自然殺傷細胞刺激因子(NKSF)或細胞毒性淋巴細胞成熟因子(CLMF),是一種異二聚體多效性細胞因子,由 40 kDa(p40)亞基和 35 kDa(p35)亞基組成。IL-12 p40亞基由IL-23共享,IL-23是另一種異二聚體細胞因子,具有與IL-12相似和不同的生物活性。IL-12由巨噬細胞和B細胞產生,已被證明對T細胞和自然殺傷(NK)細胞有多種作用。雖然小鼠IL-12在人和小鼠細胞上都有活性,但人IL-12在小鼠細胞上沒有活性。

翌圣Human IL-12 p70 ELISA(酶聯免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯免疫吸附測定試劑盒,用于定量測定血清、血漿和細胞培養上清中的人白介素12 p70(Human IL-12 p70)。特異性抗人白介素12 p70抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本,經過孵育,樣本中存在的人白介素12 p70與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質后,加入檢測抗體(生物素標記)孵育結合,經洗滌,再加入酶結合物(HRP標記鏈霉親和素)孵育結合。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中人白介素12 p70的濃度成正比。加入終止液終止反應,在450 nm 主波長,570nm次波長測定吸光度值。

 

產品信息

貨號

97025ES48 / 97025ES96 

規格

48 T / 96 T

檢測范圍

31.25-2000 pg/mL

檢測方法

雙抗夾心法

檢測物種

檢測時長

5 小時

靈敏度

1.954 pg/mL

稀釋線性

81 - 127%

回收率

70 - 107%

板內差

5.0%

板間差

8.4%

 

實驗數據

  1. 標曲數據

數據擬合繪制標準曲線,生成的標曲用于實驗數據分析

 

標準曲線

 

濃度(pg/mL)

顯色值

平均值

校準值

2000

2.147

2.016

2.082

2.039

1000

1.311

1.208

1.260

1.217

500

0.732

0.651

0.691

0.649

250

0.441

0.424

0.433

0.391

125

0.220

0.218

0.219

0.177

62.5

0.129

0.128

0.129

0.086

31.3

0.089

0.086

0.087

0.045

0

0.043

0.042

0.042

/

  1. 靈敏度檢測

人白介素12 p70的最低檢測限為1.954 pg/mL,通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。

  1. 精密度檢測

酶標板內精密度

3個已知濃度的樣本酶標板內重復測定20次,評估酶標板內的精密度。

酶標板間精密度

3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測36次,評估酶標板間的精密度。

項目

板內精密度

板間精密度

樣本

1

2

3

1

2

3

20

20

20

36

36

36

平均值

1393.2

304.7

69.2

1247.7

304.6

68.2

標準差

68.3

14.0

3.8

130.8

30.5

3.1

變異系數%

4.9

4.6

5.4

10.5

10.0

4.6

  1. 回收率檢測

  通過不同水平的人白介素12 p70添加于樣本中來測定回收率,其回收率如下:

樣本類型

平均回收率(%)

范圍(%)

血清

88.3

71.8-104.0

血漿

82.3

70.5-95.5

細胞培養上清

95.5

79.7-107.6

  1. 稀釋線性檢測

血清稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

87.7

85.2-92.0

1:04

93.8

89.3-99.5

1:08

99.7

89.8-109.2

1:16

102.8

86.5-117.8

 

血漿稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

91.2

87.8-97.2

1:04

106.2

102.2-112.5

1:08

115.2

113.7-116.9

1:16

123.0

116.1-127.1

 

細胞培養上清稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

89.9

81.6-103.3

1:04

111.2

98.5-118.5

1:08

114.8

108.3-121.6

1:16

117.8

111.9-123.9

  1. 樣本值

應用本試劑盒,檢測若干健康志愿者的樣本,志愿者的用藥史不詳。

樣本類型

樣本數目

平均值(pg/mL)

樣本值(pg/mL)

血清

n.d.

n.d.

n.d.

EDTA血漿

n.d.

n.d.

n.d.

肝素血漿

n.d.-152.3

32

n.d.-152.3

枸櫞酸鈉血漿

n.d.

n.d.

n.d.

細胞培養上清

n.d.

n.d.

n.d.

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內得31.25 pg/mL

  1. 測定特異性

本試劑盒識別天然和重組人白介素12 p70。在50 ng/mL條件下制備的下述因子進行了特異性的評估,沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。

Recombinant human:

Recombinant mouse:

G-CSF

IL-6

GP130

IL-12/IL-23 p40

IL-6

IL-12 p70

IL-6 Rα

IL-23

IL-12 p35

IL-27

IL-12/IL-23 p40

 

IL-12 Rβ1

 

IL-12 Rβ2

 

IL-23

 

IL-27

 

 

檢測簡圖

疑問解答

問題

造成原因

解決方法

標曲不好

移液量不準確

檢查移液器,按時校準,仔細操作,充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。

稀釋方法不恰當

顯色值偏低

孵育時間太短

給予足夠的孵育時間,樣本和溶解的標準品隔夜后更換。

移液量不足或稀釋不當

校準移液器和規范操作

CV偏高

酶標板清洗不當

使用正確的洗滌工序;如果使用洗板機,檢查所有的端口是否堵塞。

受污染的洗液

準備新鮮洗液

靈敏度較低

試劑盒儲存不當

按照產品組分表進行保存。

 

Ver. CN20231208

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