LIF檢測器校準流程自動和手動

來源：SCIEX（愛博才思）      分類：操作使用 2025-02-08 10:12:26 48閱讀次數(shù)

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LIF檢測器作為一種高靈敏度檢測方式在生物制品分析領(lǐng)域顯示出其它檢測器不可比擬的優(yōu)越性，應(yīng)用范圍越來越廣，包括蛋白藥的高靈敏純度分析、糖型分析、質(zhì)粒的純度分析、mRNA的純度分析等等多個方面。與應(yīng)用較多的紫外-可見吸收檢測器（UV）和二極管陣列檢測器（PDA）相比，LIF檢測器表現(xiàn)出許多優(yōu)點：

極高的靈敏度：比UV、PDA高出2～3個數(shù)量級，對于某些熒光效率高的熒光試劑甚至可以實現(xiàn)單分子檢測，達到了分子級別的高靈敏度。

? 基線干擾更小：信噪比更高，更加便于數(shù)據(jù)積分處理；

良好的狀態(tài)是保證實驗的關(guān)鍵，所以每當安裝新毛細管、更換卡盒或者重新安裝 LIF 檢測器時，均需要對 LIF 檢測器進行校準。接下來，小編就帶您一起熟悉一下LIF檢測器的校準流程。

校準方式及試劑

當采用發(fā)射光為520 nm的波長采集時，使用100um內(nèi)徑毛細管時建議執(zhí)行下文第二部分的手動校準流程，其他內(nèi)徑毛細管可執(zhí)行自動校準流程，需要的試劑如下；

試劑	貨號
LIF Performance Test Mix	726022
RUN BUFFER A	338426
DDI Water	N/A

校準所需試劑

自動校準流程

重要：用戶必須擁有儀器管理的權(quán)限

1.PA 800 Plus 儀器處于關(guān)機狀態(tài)安裝 LIF 檢測器。

2.打開儀器及激光器，并使 LIF 激光器預(yù)熱 30 分鐘。

3.運行32Karat。

4.點擊Tools＞Enterprise Login以管理員身份登錄。

5.選擇CHO儀器圖標，然后右鍵Configure＞Instrument。

6.在儀器配置窗口上選擇Configure。

7.雙擊選擇PA 800 Plus System Configuration右側(cè)的LIF Detector圖標。

8.32Karat 軟件配置對話框出現(xiàn)，如圖1：

圖1. 32Karat 軟件對話框

9.在軟件配置對話框中選擇LIF Calibration Wizard展示校準向?qū)В鐖D2

執(zhí)行校準

1. 在校準選項中選擇Auto，如圖2并點擊Next。

圖2. 校準向?qū)Ы缑妗x擇Auto

2. 設(shè)置目標RFU值，毛細管內(nèi)徑為100 μm時，目標RFU值輸入62，毛細管內(nèi)徑為50 μm時，目標RFU值輸入15；毛細管長度為實際長度。如圖3并點擊Next。

圖3. 校準向?qū)Ы缑妗诙?/p>

擺放樣品瓶并校準檢測器

1) 向電泳小瓶內(nèi)加入 1.5 mL 的 Capillary Performance Run Buffer A 溶液并放置在 右圖 的樣品盤位置上。

2) 向內(nèi)襯管中加入 200 μL 比值為 1:1 的 LIF Performance Test Mix：Capillary Performance Run Buffer A 溶液，并放置在右圖的樣品盤位置上。

3) 在廢液瓶的位置上放置一個空的電泳小瓶。

4) 點擊 Next

注：如使用涂層毛細管，使用DDI water代替run buffer A；自動校準之前建議先用A1位置溶液20psi沖洗毛細管5min

圖4. 校準向?qū)Ы缑妗谌?/p>

校準結(jié)束后，會有一個對話框出現(xiàn)，如圖5。在校準因子區(qū)域會出現(xiàn)一個數(shù)字。如果數(shù)字在0.1—10之間，選擇Accept并結(jié)束校準。如果數(shù)字大于10或小于0.1，請查看CCF問題排查過程。

圖5. 校準向?qū)Ы缑妗谒牟?/p>

手動校準流程

重要：用戶必須擁有儀器管理的權(quán)限

當使用100um內(nèi)徑毛細管時建議使用手動校準

1. PA 800 Plus 儀器處于關(guān)機狀態(tài)安裝 LIF 檢測器。

2. 打開儀器及激光器，并使 LIF 激光器預(yù)熱 30 分鐘。

3. 運行32Karat。

4. 點擊Tools＞Enterprise Login以管理員身份登錄。

5.選擇CHO儀器圖標，然后右鍵Configure＞Instrument。

6. 在儀器配置窗口上選擇Configure。

7. 雙擊選擇PA 800 Plus System Configuration右側(cè)的LIF Detector圖標。

8. 32Karat 軟件配置對話框出現(xiàn)，如圖1:

圖1. 32Karat 軟件對話框

9. 在軟件配置對話框中選擇LIF Calibration Wizard展示校準向?qū)В鐖D2

圖1. 32Karat 軟件對話框

執(zhí)行校準

1. 在校準選項中選擇Manual，如圖2并點擊Next。

圖2. 校準向?qū)Ы缑妗x擇Auto

2. 在彈出的校準結(jié)果界面，將CCF值改為1，如圖3.Accept CCF值，關(guān)閉校準界面。

圖3. 手動校準界面

3. 登錄儀器操作模塊，在菜單欄file→method→new，新建方法。編輯LIF calibration方法，如下圖：

4. 運行LIF calibration方法，

5. 計算校準因子：Factor=理論值RFU/實測值RFU。

注：毛細管內(nèi)徑為100 μm時，理論RFU值62，毛細管內(nèi)徑為50 μm時，理論RFU值15；

6. 手動輸入校準因子：打開LIF校準向?qū)В匦逻x擇Manual，點擊Next，在彈出的對話框中輸入channal 1的計算校準因子。

CCF問題排查過程

CCF ＜ 1

問題	糾正方向
CCF值在0.1至1之間	· 系統(tǒng)沒有問題，運行一個標準品并驗證系統(tǒng)可接受的性能。
系統(tǒng)性能不被接受或CCF值小于0.1	· 確保毛細管完好。 · 確保激光光源的打開。 · 確保濾光片正確的安裝在LIF檢測器中。 · 聯(lián)系SCIEX售后工程師。

CCF ＞ 1

問題	糾正方向
CCF值在1至10之間	· 運行一個標準品檢測儀器性能是否能被接受。
系統(tǒng)性能不被接受或CCF值小于0.1	? 確保激光光源的打開。 ? 確保濾光片正確的安裝在LIF檢測器中。 ? 更換試劑和毛細管重新進行校準。 ? 聯(lián)系SCIEX售后工程師。

如有任何疑問，請撥打SCIEX服務(wù)熱線：

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