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全能型逆轉錄酶Ultra Reverse Transcriptase(200 U/μL)

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為您推薦

產品特點

全長cDNA文庫構建;

終點法PCR;

RT-PCR及實時定量RT-PCR等

詳細介紹


Hifair? Ultra Reverse Transcriptase是對Hieff? M-MLV (H-) Reverse Transcriptase進行基因工程改造的全新逆轉錄酶,該酶缺乏RNase H活性,合成全長cDNA的能力大幅提升,可擴增長達20 kb的cDNA。Hifair? Ultra Reverse Transcriptase的熱穩定性顯著提高,耐受溫度達65℃,可對具有復雜二級結構的RNA模板高效逆轉錄。與Hieff? M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,Hifair? Ultra Reverse Transcriptase具有更高的持續合成能力及合成速率,同時增強了耐抑|制劑的能力,可有效解決樣品中的抑|制劑導致逆轉錄效率低下的問題。

 

產品組分

編號

組分

產品編號/規格

14604ES84 

(2000 U)

14604ES92

(10000 U)

14604ES98

(200000 U)

14604-A

Hifair? Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL)

10 μL

50 μL

1 mL

14604-B

5×Hifair? Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

50 μL

250 μL

5×1 mL

 

產品應用

全長cDNA文庫構建;

終點法PCR;

RT-PCR及實時定量RT-PCR等。

 

運輸與保存方法

干冰運輸,-20oC保存,有效期一年。

 

注意事項

1)請保持實驗區域潔凈;操作時需穿戴干凈的手套、口罩;實驗所用耗材均需保證RNase free,以防止RNase污染;

2)所有操作均應在冰上進行,防止發生RNA降解;

3)為保證逆轉錄成功,建議使用高質量的RNA樣本;

4)為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

5)本產品僅用作科研用途!

 

一鏈cDNA合成操作步驟

1. RNA變性(此步為可選步驟,RNA變性有助于打開二級結構,可在很大程度上提高一鏈cDNA的產量。)

組分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)  

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:1 pg-500 ng

65℃加熱5 min,迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應液后加入下表中的逆轉錄反應液,并用移液器輕輕吹打混勻。

2. 逆轉錄反應液配制

組分

使用量

上一步的反應液

13 μL

5×Hifair? Ultra Reverse Transcriptase Reaction Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair? Ultra Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase Inhibitor (40 U/μL)

1 μL

3. 逆轉錄程序設置

溫度

時間

25℃

5 min

50℃

15 min

85℃

5 min

【注】:1)當使用Random Primers時,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略;

2)逆轉錄溫度:推薦使用50℃。對于高GC含量模板或者復雜模板,可將逆轉錄溫度提高到55℃-60℃;

3)85℃加熱5 min,目的是使逆轉錄酶失活。

※ 逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應,也可-20℃短期保存,若需長期保存,建議分裝后,于-80℃保存,避免反復凍融。

HB221114


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