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耐熱70℃逆轉錄酶Hifair? Super Reverse Transcriptase(200 U/μL)

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詳細介紹

產品簡介  

Hifair® Super Reverse Transcriptase是通過ZymeEditor定向進化平臺對M-MLV進行定向改造獲得的新一代逆轉錄酶,該酶缺乏RNase H活性,其熱穩定性大幅度提高,可耐受高達70℃的反應溫度,非常適合具有復雜二級結構的RNA模板的高效逆轉錄。

 

產品信息

貨號

14612ES92 / 14612ES93

規格

10,000 U / 50,000 U

單位定義

Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物,在37℃,10 min內,將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。

 

組分信息

組分編號

組分名稱

14612ES92

14612ES93

14612

Hifair® Super Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

250 μL

 

產品應用

本產品適用于RT-PCR、RT-qPCR、RT-LAMP、RNA-seq、cDNA合成等實驗,逆轉錄反應溫度最高可達70℃。

 

儲存條件

-25~-15℃保存,有效期18個月。

 

使用說明

第一鏈cDNA合成操作步驟

1. RNA變性(此步為可選步驟,RNA變性有助于打開二級結構,可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產量。)

組分

使用量

RNase free ddH2O

to 13 μL

Oligo (dT)18 (50 μM)

or Random Primers (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

or 1 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg - 5 μg或mRNA: 10 pg - 500 ng

65℃加熱5 min,迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應液后,加入下表中的逆轉錄反應液,并輕輕吹打混勻。

2. 逆轉錄反應體系配制(20 μL體系)

組分

使用量

上一步的反應液

13 μL

reaction Buffer

4 μL

dNTP Mix (10 mM)

1 μL

Hifair® Super Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase inhibitor (40 U/µL)

1 μL

3. 逆轉錄程序設置

溫度

時間

25℃*

5 min

50-70

15-30 min

85℃**

5 min

*當使用Random Primers時,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

**85℃加熱5 min,目的是使逆轉錄酶失活可根據實際情況進行設置

逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應,也可-20℃短期保存,若需長期保存,建議分裝后,于-80℃保存,避免反復凍融。

 

注意事項

1. 請保持實驗區域潔凈;操作時需穿戴干凈的手套、口罩;實驗所用耗材均需保證RNase free,以防止RNase污染。

2. 所有操作均應在冰上進行,防止RNA降解。

3. 為保證高效率逆轉錄,建議使用高質量的RNA樣本

4. 本產品僅用作科研用途。

5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20240522

 

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