5×Hifair^® Ⅲ Buffer 可與Hifair^® Ⅲ Reverse Transcriptase (Cat#14601)配套使用，為逆轉(zhuǎn)錄創(chuàng)造最佳條件。

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品應用

全長cDNA文庫構建；終點法PCR；實時定量PCR等。

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，有效期1年。

注意事項

1）請保持實驗區(qū)域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染。

2）所有操作均應在冰上進行，防止RNA降解。

3）為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄，建議使用高質(zhì)量的RNA樣本。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

5）本產(chǎn)品僅作科研用途！

第一鏈cDNA合成操作步驟

1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結構，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。）

65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應液后加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應液，并用移液器輕輕吹打混勻。

2. 逆轉(zhuǎn)錄反應體系配制（20 μL體系）

3. 逆轉(zhuǎn)錄程序設置

【注】：1）當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)₁₈或Gene Specific Primers，此步可省略；

2）逆轉(zhuǎn)錄溫度：推薦使用55℃；對于高GC含量模板或者復雜模板，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高到60℃；

3) 可將逆轉(zhuǎn)錄時間延長到45-60min，有助于提高產(chǎn)量；

4）85℃加熱5 min，目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。

※ 逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。

HB220615